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磷酸化蛋白檢測(cè)試劑盒相較于傳統(tǒng)方法的優(yōu)勢(shì)
發(fā)布日期：
2017-12-18
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磷酸化蛋白檢測(cè)試劑盒已逐漸成為測(cè)定蛋白磷酸化的一種有力方法。ELISA的定量能力優(yōu)于Western blot，且在調(diào)節(jié)激酶活性和功能的研究中表現(xiàn)出巨大的作用。這種微孔板形式的分析一般利用目的蛋白特異的捕獲抗體，與磷酸化狀態(tài)無(wú)關(guān)。隨后讓目的蛋白結(jié)合在抗體包被的分析板中，目的蛋白可以是純的，也可以是復(fù)雜的異質(zhì)樣品(如細(xì)胞裂解液)中的一個(gè)組分。加入待分析的磷酸化位點(diǎn)特異的檢測(cè)抗體。這些分析通常設(shè)計(jì)為顯色或熒光檢測(cè)。產(chǎn)生的信號(hào)強(qiáng)度與zui初樣品中存在的磷酸化蛋白的濃度成正比。與更為傳統(tǒng)的免疫印跡相比，磷酸化特異的ELISA技術(shù)具有一些優(yōu)點(diǎn)。
首先，利用經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)品，可輕松定量結(jié)果。
其次，以三明治形式使用目的蛋白特異的兩個(gè)抗體，帶來(lái)了高的特異性。
第三，ELISA的靈敏度更高允許使用更少量樣品，檢測(cè)低豐度的蛋白。
zui后，微孔板形式的通量比傳統(tǒng)的Western blotting要高得多。ELISA通常帶來(lái)了激酶活性的間接測(cè)定。不過(guò)，另一類(lèi)ELISA技術(shù)使用固定化的捕獲抗體、底物和磷酸化底物的檢測(cè)方法，帶來(lái)激酶活性的更直接測(cè)定。
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